Комплексный анализ субпопуляций В-клеток и фолликулярных Т-клеток в небных миндалинах человека

Введение. Небные миндалины играют ключевую роль в защите организмa человека от многочисленных патогенов, попадающих через верхние дыхательные пути и пищеварительный тракт. Одной из основных функций небных миндалин является формирование гуморального иммунитета, который возникает в результате В-клеточного ответа на чужеродные антигены при участии и под контролем фолликулярных Т-клеток. Нарушения в вовлечении Ви Т-клеток в иммунный ответ в миндалинах могут быть связаны с различными патологиями, хроническими инфекциями, иммунодефицитами или лимфопролиферативными заболеваниями.

Цель. Провести методический анализ различных субпопуляций В-клеток и Т-фолликулярных клеток в миндалинах с помощью проточной цитометрии. Оценить различные компоненты локального иммунного ответа.

Материалы и методы. Отбор пациентов для исследования проводили в оториноларингологическом отделении городской клинической больницы №1 им. Н.И. Пирогова г. Москвы с 2024 по 2025 г. В качестве материала использовали миндалины, полученные в ходе тонзиллэктомии. Выделенные из органов мононуклеарные клетки (МНК) окрашивали смесью поверхностных маркеров В-клеток и Т-фолликулярных клеток, а также проводили внутриклеточное окрашивание транскрипционных факторов Bcl6 и FoxP3 для дальнейшего анализа методом проточной цитометрии.

Результаты и обсуждение. На основе полученных данных была предложена стратегия выделения основных субпопуляций В-клеток (наивных, двойных негативных В-клеток, клеток памяти, В-клеток герминативных центров (ГЦ)), реализующих гуморальный иммунный ответ в миндалинах. Кроме этого, был разработан подход для анализа Т-фолликулярных клеток в миндалинах с выделением субпопуляций Т-фолликулярных хелперных (Тфх), регуляторных (Тфр) клеток, а также CD25++ Тфх, которые необходимые для контроля и регуляции В-клеточных ответов.

Выводы. Разработанный анализ может быть использован как в фундаментальных исследованиях, так и в клинической практике для диагностики и мониторинга иммунопатологических состояний.

1. Nave H, Gebert A, Pabst R. Morphology and immunology of the human palatine tonsil. Anat Embryol. 2001;204(5):367–373. https://doi.org/10.1007/s004290100210.

2. Xiao ZX, Miller JS, Zheng SG. An updated advance of autoantibodies in autoimmune diseases. Autoimmun Rev. 2021;20(2):102743. https://doi.org/10.1016/j.autrev.2020.102743.

3. Duddy ME, Alter A, Bar-Or A. Distinct profiles of human B cell effector cytokines: a role in immune regulation? J Immunol. 2004;172(6):3422–3427. https://doi.org/10.4049/jimmunol.172.6.3422.

4. Ghosh D, Jiang W, Mukhopadhyay D, Mellins ED. New insights into B cells as antigen presenting cells. Curr Opin Immunol. 2021;70:129–137. https://doi.org/10.1016/j.coi.2021.06.003.

5. Crotty S. T follicular helper cell biology: a decade of discovery and diseases. Immunity. 2019;50(5):1132–1148. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.04.011.

6. Xie MM, Dent AL. Follicular regulatory T cell subsets in mice and humans: origins, antigen specificity and function. Int Immunol. 2023;35(12):583–594. https://doi.org/10.1093/intimm/dxad031.

7. Mintz MA, Cyster JG. T follicular helper cells in germinal center B cell selection and lymphomagenesis. Immunol Rev. 2020;296(1):48–61. https://doi.org/10.1111/imr.12860.

8. Qi J, Liu C, Bai Z, Li X, Yao G. T follicular helper cells and T follicular regulatory cells in autoimmune diseases. Front Immunol. 2023;14:1178792. https://doi.org/10.3389/fimmu.2023.1178792.

9. Gutiérrez-Melo N, Baumjohann D. T follicular helper cells in cancer. Trends Cancer. 2023;9(2):91–101. https://doi.org/10.1016/j.trecan.2022.11.005.

10. Kaminski DA, Wei C, Qian Y, Rosenberg AF, Sanz I. Advances in human B cell phenotypic profiling. Front Immunol. 2012;3:302. https://doi.org/10.3389/fimmu.2012.00302.

11. Takizawa M, Sugane K, Agematsu K. Role of tonsillar IgD⁺CD27⁺ memory B cells in humoral immunity against pneumococcal infection. Hum Immunol. 2006;67(12):966–975. https://doi.org/10.1016/j.humimm.2006.10.008.

12. Sanz I, Wei C, Jenks SA, Cashman KS, Tipton C, Woodruff MC et al. Challenges and opportunities for consistent classification of human B cell and plasma cell populations. Front Immunol. 2019;10:2458. https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.02458.

13. Klein U, Rajewsky K, Küppers R. Human immunoglobulin (Ig)M⁺IgD⁺ peripheral blood B cells expressing the CD27 cell surface antigen carry somatically mutated variable region genes: CD27 as a general marker for somatically mutated (memory) B cells. J Exp Med. 1998;188(9):1679–1689. https://doi.org/10.1084/jem.188.9.1679.

14. Le Coz C, Oldridge DA, Herati RS, De Luna N, Liu Y, Klocperk A et al. Human T follicular helper clones seed the germinal center–resident regulatory pool. Sci Immunol. 2023;8(82):eade8162. https://doi.org/10.1126/sciimmunol.ade8162.

15. Vinuesa CG, Linterman MA, Yu D, MacLennan ICM. Follicular helper T cells. Annu Rev Immunol. 2016;34:335–368. https://doi.org/10.1146/annurev- immunol-041015-055605.

16. Le Coz C, Oldridge DA, Herati RS, De Luna N, Liu Y, Klocperk A et al. Human T follicular helper clones seed the germinal center–resident regulatory pool. Sci Immunol. 2023;8(82):eade8162. https://doi.org/10.1126/sciimmunol.ade8162.

17. MacLennan ICM. Germinal centers. Annu Rev Immunol. 1994;12:117–139. https://doi.org/10.1146/annurev.iy.12.040194.001001.

18. Victora GD, Nussenzweig MC. Germinal centers. Annu Rev Immunol. 2012;30:429–457. https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-020711-075032.

19. Nutt SL, Hodgkin PD, Tarlinton DM, Corcoran LM. The generation of antibody-secreting plasma cells. Nat Rev Immunol. 2015;15(3):160–171. https://doi.org/10.1038/nri3795.

20. Ahn S, Cunningham-Rundles C. Role of B cells in common variable immune deficiency. Expert Rev Clin Immunol. 2009;5(5):557–564. https://doi.org/10.1586/eci.09.43.

21. Basso K, Dalla-Favera R. Germinal centres and B cell lymphomagenesis. Nat Rev Immunol. 2015;15(3):172–184. https://doi.org/10.1038/nri3814.

22. Seifert M, Küppers R. Human memory B cells. Leukemia. 2016;30(12):2283–2292. https://doi.org/10.1038/leu.2016.226.

23. Liu Z, Zou Y, Davidson A. Plasma cells in systemic lupus erythematosus: the long and short of it all. Eur J Immunol. 2011;41(3):588–591. https://doi.org/10.1002/eji.201041354.

24. Colonna-Romano G, Bulati M, Aquino A, Lio D, Candore G, Caruso C. A double-negative (IgD⁻CD27⁻) B cell population is increased in the peripheral blood of elderly people. Mech Ageing Dev. 2009;130(10):681–690. https://doi.org/10.1016/j.mad.2009.08.003.

25. Wei C, Anolik JH, Cappione A, Zheng B, Pugh-Bernard AE, Brooks J et al. A new population of cells lacking expression of CD27 represents a notable component of the B cell memory compartment in systemic lupus erythematosus. J Immunol. 2007;178(10):6624–6633. https://doi.org/10.4049/jimmunol.178.10.6624.

26. Jacobi AM, Reiter K, Mackay M, Aranow C, Hiepe F, Radbruch A et al. Activated memory B cell subsets correlate with disease activity in systemic lupus erythematosus: delineation by expression of CD27, IgD, and CD95. Arthritis Rheum. 2008;58(6):1762–1773. https://doi.org/10.1002/art.23498.

27. Woodruff MC, Ramonell RP, Nguyen DC, Cashman KS, Saini AS, Haddad NS et al. Extrafollicular B cell responses correlate with neutralizing antibodies and morbidity in COVID-19. Nat Immunol. 2020;21(10):1506–1516. https://doi.org/10.1038/s41590-020-00814-z.

28. Moir S, Ho J, Malaspina A, Wang W, DiPoto AC, O’Shea MA et al. Evidence for HIV-associated B cell exhaustion in a dysfunctional memory B cell compartment in HIV-infected viremic individuals. J Exp Med. 2008;205(8):1797–1805. https://doi.org/10.1084/jem.20072683.

29. Jenks SA, Cashman KS, Zumaquero E, Marigorta UM, Patel AV, Wang X et al. Distinct effector B cells induced by unregulated Toll-like receptor 7 contribute to pathogenic responses in systemic lupus erythematosus. Immunity. 2018;49(4):725–739. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2018.08.015.м.